Truss dilahirkan sebagai Mary Elizabeth Truss pada 26 Julai 1975 di Oxford, England, kepada John Kenneth dan Priscilla Mary Truss.[1][4][5] Sejak kecil dia dikenali dengan nama tengahnya "Elizabeth".[6] Bapanya ialah seorang profesor matematik tulen di University of Leeds, manakala ibunya ialah seorang jururawat, guru, dan ahli Kempen untuk Perlucutan Senjata Nuklear.[7] Truss telah menggambarkan kedua-duanya sebagai "di sebelah kiri Buruh".[8] Apabila Truss kemudiannya bertanding untuk pilihan raya ke Parlimen, ibunya bersetuju untuk berkempen untuknya manakala bapanya enggan berbuat demikian.[8][9]

Keluarga itu berpindah ke Scotland ketika dia berumur empat tahun. Truss menghadiri Sekolah Rendah Barat di Paisley, Renfrewshire,[8][5] diikuti oleh Sekolah Roundhay, sebuah sekolah komprehensif di timur laut Leeds. Dia tinggal di Kanada selama setahun, dan membezakan sikap bersaing dalam persekolahan di sana dengan pendidikan "trend" yang diterimanya di Leeds.[8] Dia membaca Falsafah, Politik dan Ekonomi di Kolej Merton, Oxford.[1]

Truss ialah Presiden Oxford University Liberal Democrats dan ahli jawatankuasa eksekutif kebangsaan sayap belia dan pelajarnya. Beliau juga menyatakan sentimen republikan dalam ucapan pada persidangan Demokrat Liberal 1994.[10][11] Truss menyertai Parti Konservatif pada tahun 1996.[12]